Importantes avances en la germinación "in vitro" de semillas y aislamiento de hongos simbiontes de orquídeas autóctonas


Con la incorporación de la Dra. Pilar Torrente Paños al Grupo de Investigación E005/07 de la Universidad de Murcia, su participación en el proyecto PEPLAN (Subproyecto S-1 METODOLOGÍAS DE CONSERVACIÓN DE GERMOPLASMA DE CARACTERÍSTICAS ESPECIALES: ORQUÍDEAS), y aprovechando su dilatada experiencia en cultivo in vitro y en la identificación y manejo de hongos, se ha abierto una nueva línea dentro del grupo ligada a la germinación y micorrización de los representantes silvestres de la familia Orquidáceas, en el ámbito del Mediterráneo.

En relación a la metodología del cultivo in vitro de orquídeas ha sido de especial ayuda las consultas realizadas a los investigadores del IVIA Juana María Arregui y José Juárez, con experiencia contrastada en la germinación de orquídeas en el ámbito de la Comunidad Valenciana.

Los primeros trabajos se iniciaron con semillas frescas a partir de cápsulas de las especies Neotinea maculata, Orchis coriophora, Epipactis kleinii, E. tremolsii, Cephalanthera damasonium y Dactylorhiza elata.

Manipulación de las cápsular esterilizadas para la siembra

Manipulación de las cápsulas esterilizadas para la siembra

Se ha ensayado con los medios de cultivo MS y BM1, resultando más eficaz el segundo. La formación de protocormos varía ampliamente entre los 20 días y varios meses, dependiendo de las especies.

Por otro lado, se ha iniciado cultivo in vitro a partir de semillas maduras de Neotinea maculata y Dactylorhiza elata que se encontraban conservadas desde la fecha de recolección en las condiciones adecuadas. Al cabo de dos semanas se comprobó el desarrollo de los primeros protocormos de Dactylorhiza elata en BM1 y en un mes casi todas las semillas sembradas en este medio habían evolucionado a la fase de protocormo.

Siembra de semillas para cultivo "in vitro"

Siembra de semillas para cultivo "in vitro"

En este momento se tienen protocormos de Dactylorhiza elata en frío obtenidos de semillas maduras y de semillas de cápsulas verdes que nos permitirán apuntar si hay diferencias en el desarrollo de la planta.

Además de iniciar el cultivo in vitro, se han ido testando raíces de diez especies con el fin de evaluar el grado de micorrización. El objetivo es ver si hay diferencia en la micorrización según la estacionalidad y aislar el hongo micorrízico para realizar la germinación simbiótica. Hasta el momento se han evaluado 45 ejemplares correspondientes a las siguientes especies:

Neotinea maculata, Ophrys fusca, Ophrys scolopax, Ophrys speculum, Serapias lingua, Serapias parviflora, Orchis papilionacea, Orchis collina, Epipactis kleinii, Ophrys lutea, Limodorum abortivum y Barlia robertiana.

Hongo micorrizico de Neotinea maculata visto al microscopio óptico

Hongo micorrizico de Neotinea maculata visto al microscopio óptico

Al mismo tiempo que se separaron las raíces para teñir, se cogieron muestras para esterilizar con el fin de proceder al aislamiento de los hongos presentes en las mismas. Al cabo de dos días se comenzó a ver el crecimiento de los micelios. Éstos crecieron y fueron aislados para posteriormente ser secuenciados e identificados. Estamos a la espera de los resultados de los aislamientos obtenidos de tres de las especies estudiadas.

Crecimiento del hongo de Neotinea maculata en placa Petri

Crecimiento del hongo de Neotinea maculata en placa Petri

Al micelio aislado se le realizó una extracción de ADN. A partir de los extractos de ADN y posterior amplificación del espaciador nuclear ribosomal ITS se ha procedido a su secuenciación.

A la espera de confirmación, mediante comparación de los datos registrados en GENBANK, la identificación de las muestras apunta hacia especies distintas a las recogidas hasta el momento actual en la bibliografía.

Las plantas de las que proceden las raíces del estudio anteriormente descrito se conservan en maceta en condiciones de invernadero. A fecha de hoy, aun cuando sus raíces han sido manipuladas, todas viven e incluso varias de ellas han florecido. En dichas flores se ha procedido a realizar la polinización artificial ya que el invernadero está libre de agentes polinizadores naturales. Se pretende conseguir su fructificación.

Colección de orquídeas en invernadero

Colección de orquídeas en invernadero

Los resultados obtenidos pueden considerarse muy prometedores respecto a la naturaleza de los hongos simbiontes de orquídeas terrestres mediterráneas y su posible utilización en la mejora de protocolos de germinación.

Otra posible aplicación de gran interés estaría relacionada con el aislamiento de cepas de algunas especies con potencial en la lucha biológica contra microorganismos patógenos.


<< Excursión a Cabo Cope | Dos nuevas especies de Fissidens (musgos) para la flora de la Peninsula Iberica >>
<< Volver a Noticias